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              Benzonase Nuclease高活力全能核酸酶——純度>90%,酶活>250U/μL,無內毒素,無標簽

            1. 產品簡介

            全能核酸酶,又稱廣譜核酸酶,英文名稱Benzonase Nuclease,一種來源于Serratia Marcescen的基因工程酶。它可以降解所有形式的DNARNA,包括單鏈、雙鏈、線狀、環狀、天然以及變性的核酸,將它們消化成3-8個堿基長度的5-單磷酸寡核苷酸,且不具有堿基識別特異性。另外,全能核酸酶在非常廣泛的條件下(6M urea0.1 M Guanidine HCl0.4% Triton X1000.1% SDS1 mM EDTA1 mM PMSF)都能保持很高的穩定性和消化活力,非常適用于作為各類科學研究以及疫苗、蛋白、多糖類制藥工業的首選酶制劑,去除樣本或制品中的核酸殘留,提升樣本純度和制品生物功效。

            http://www.rcsb.org/pdb/images/1QL0_bio_r_500.jpg?bioNum=1

            全能核酸酶結構圖

             

            2. 產品應用

            1)用于除去生物制品中的DNA/RNA

            美國FDA對治療用每劑量的生物制品的核酸含量要求為低于10 pg,國內對此相應的要求為低于100 pg。全能核酸酶可用于疫苗、多糖、蛋白等工業生物制品中核酸的去除,使生物制品的最終核酸含量符合要求,同時提高生物制品功效。

             2)用于降低細胞破碎后的粘度

            全能核酸酶可以降解所有形式的核酸,降低細胞裂解液的粘度,提高蛋白得率,改善分離效果,使之易于過濾(尤其是超濾),利于下游層析純化操作。

            http://www.sinobiologicalcdn.com/SuperNuclease/1cell-lysate.png

            細胞裂解液Benonase處理(A)和未處理(B)比較圖

            3)用于細胞培養來源產物的純化過程

            核酸很容易粘附在病毒樣顆粒(VLP)、病毒粒子、包涵體等細胞生成顆粒的表面,使顆粒大小或電荷發生改變,造成這些顆粒的聚集,如外周血單細胞(PBMC)存放過程中的結塊現象。全能核酸酶可有效降解核酸,避免核酸對細胞產物的影響以及純化效率,利于提高細胞產物純化效率。

            4)用于生化分析樣品的制備

            ELISA、色譜分析、雙相電泳和足跡分析等過程中,用全能核酸酶處理含有核酸的蛋白樣品,可提高分辨率,并提高回收率。

            小鼠腦核蛋白Benonase處理(A)和未處理(B)雙向電泳比較圖

            3. 產品性質

            1  產品性質表

             

            英文別名(English Synonym

            BenzNuclease; Universal Nuclease; Benzonase endonuclease

             

            CAS號(CAS NO.

            9025-65-4

             

            分子量(Molecular Weight

            27.9 kDa

            «   

            來源(Source

            真核酵母表達

            «   

            標簽(Tag

            無標簽

            «   

            純度(Purity

            http://www.acrobiosystems.cn/images/sds/BEE-N3116.jpg90%SDS-PAGE

            «   

            酶活(Enzyme Activity

            ≥250 U/μL

            «   

            比活(Specific Activity

            ≥1.0×106 U/mg蛋白

            «   

            蛋白酶(Protease

            Undetected

            «   

            內毒素(Endotoxin

            Undetected(鱟試劑法)

             

            最適pHOptimum pH

            8.0(工作范圍pH 6-10)

             

            最適溫度(Optimum Temperature

            37℃(工作范圍0-42℃

             

            輔助因子(Cofactor

            1-10 mM Mg2+

             

            儲存緩沖液(Storage Buffer

            20 mM Tris-Cl pH8.02 mM MgCl22 mM NaCl50%甘油

             

            稀釋緩沖液(Dilution Buffer

            20 mM Tris-Cl pH8.02 mM MgCl22 mM NaCl

            «   

            活性單位定義(Unit Definition

            37℃pH 8.0反應條件,2.625 mL反應體系中,在30 min內使A260吸收值變化1.0(相當于完全消化37 μg鮭魚精DNA成為寡核苷酸)所用的酶量定義為一個活性單位(U)。

             

            4. 產品使用

            1)產品作用條件

            全能核酸酶在非常廣泛的條件下,都能保持很高的穩定性和消化活力。表1中列舉了全能核酸酶可發揮核酸消化作用的部分條件參數。除此之外,全能核酸酶還可耐受6 M Urea0.1 M Guanidine HCl0.4% Triton X1000.1% SDS1 mM EDTA1 mM PMSF0.4% Sodium deoxycholate

            2 全能核酸酶作用條件

            條件參數

            最適條件

            可作用條件

            Mg2+

            1-2 mM

            1-10 mM

            pH

            8.0-9.2

            6.0-10.0

            Temp

            37℃

            0-42℃

            DTT

            0-100 mM

            >100 mM

            β-Mercaptoethanol

            0-100 mM

            >100 mM

            Monovalent cationNa+K+

            0-20 mM

            0-150 mM

            PO43-

            0-10 mM

            0-100 mM

            注:1)最適條件為全能核酸酶釋放≥90%活力的條件,可作用條件為全能核酸酶釋放≥15%活力的條件;2)全能核酸酶活力定義為在37℃pH 8.0反應條件,2.625 mL反應體系中,在30 min內使A260吸收值變化1.0(相當于完全消化37 μg鮭魚精DNA成為寡核苷酸)所用的酶量定義為一個活性單位(U)。

            2)產品酶活測定

            一個酶活性單位(U)定義為:在37°CpH 8.0的反應條件下,30分鐘內可將37 µg的底物DNA(鮭魚精DNA)消化成為寡核苷酸(相當于使260 nm吸收值變化1.0)的Binuclease核酸酶的量。

            根據測試,本產品酶活≥250 U/μL,比活≥1.0×106 U/mg蛋白。

            3)產品運輸、儲存及穩定性

            固體酶可室溫運輸,建議儲存溫度低于4°C。液體酶宜冷藏運輸,建議-20°C保存。

            液體酶在-20°C條件下,有效期為1年。打開包裝使用后,如果在2-8°C環境下放置超過一周時間,建議過濾除菌,防止微生物污染。固體酶儲存有效期為3年,打開包裝后及時使用,避免受潮。

            5. 價格對比

            Yeasen致力于為您提供性價比最高的產品。

            4  Yeasen全能核酸酶價格優勢(25 KU規格)

            6. 文獻引用

            [1] Berg M G, Yamaguchi J, Alessandri-Gradt E, et al. A pan-HIV strategy for complete genome sequencing[J]. Journal of clinical microbiology, 2016, 54(4): 868-882.

            [2] Jankowska U, Latosinska A, Skupien-Rabian B, et al. Optimized procedure of extraction, purification and proteomic analysis of nuclear proteins from mouse brain[J]. Journal of neuroscience methods, 2016, 261: 1-9.

            [3] Kulkarni P S, Sahai A, Gunale B, et al. Development of a new purified vero cell rabies vaccine (Rabivax-S) at the serum institute of India Pvt Ltd[J]. Expert Review of Vaccines, 2017, 16(4): 303-311.

            [4] Rai T S, Adams P D. Chapter Fourteen-ChIP-Sequencing to Map the Epigenome of Senescent Cells Using Benzonase Endonuclease[J]. Methods in enzymology, 2016, 574: 355-364.

            [5] Yang Z, Li M, Chen W, et al. The smart solution for DNA removal in biopharmaceutical production by benzonase endonuclease[J]. Journal of Applied Virology, 2013, 2(1).

            7. 常見問答

            Q. 產品應如何稀釋?

            A:正常建議稀釋比例(終濃度)1:1000-1:20000,其中時間、溫度、稀釋比例為影響反應的正面因素。

            Q. 產品能否可以減少用量?

            A:如希望減少用量,可酌情提高反應溫度或延長時間。

            Q. 使用該產品進行消化反應的抑制因子有哪些?

            A:在含有以下物質的體系中,全能核酸酶的活性會降低50%或以上:>150 mM一價陽離子,>100 mM磷酸鹽,>100 mM硫酸銨,>100 mM鹽酸胍,>0.1% SDS>1% Triton X-100>1% Tween 20

            Q. 怎樣滅活全能核酸酶?如何去除?

            A:采用EDTA螯合金屬離子會可逆地抑制全能核酸酶活性,極端條件會造成不可逆失活,例如100 mM NaOH70℃處理30 min等。全能核酸酶可采用陰離子交換柱或氣相色譜法從目的產物中分離出去。

            Q. 全能核酸酶與蛋白酶抑制劑混合物是否兼容?

            A:全能核酸酶與不含EDTA的蛋白酶抑制劑混合物兼容。若含有EDTA且濃度>1 mM時,會抑制核酸酶活性,建議:如果必須加EDTA,按照2EDTA濃度補加Mg2+

            Q. 產品的用量是多少?

            A:需要根據重懸菌體所需裂解液的體積來確定需要酶的量。若普通蛋白純化,則需要濃度為25 U/mL;核蛋白則需要100 U/mL;病毒表達蛋白純化需要濃度為12.5 U/mL;疫苗產品需要量為0.9-1.1 U/mL

            Q. 產品的穩定性如何,如果不小心在室溫放置幾天后,酶活性會受到怎樣的影響?

            A:室溫2-3天,對活力影響不大。

            Q. 全能核酸酶能在尿素環境消化核酸嗎?

            A:全能核酸酶在尿素濃度為6 M時活性先增加,隨著時間延長活性又有降低;在尿素為7 M時,全能核酸酶15分鐘后出現變性并失活。但是在酶失活前多數核酸已經降解了。可通過提高全能核酸酶使用濃度補償7 M尿素的影響。

            8. 訂購信息

            產品

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            規格

            價格(元)

            Benzonase Nuclease 全能核酸酶

            20125ES25

            25 KU

            418.00

            Benzonase Nuclease 全能核酸酶

            20125ES50

            50 KU

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            Benzonase Nuclease 全能核酸酶

            20125ES60

            100 KU

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            Benzonase Nuclease 全能核酸酶

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            1000 KU

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