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            產品名稱: RIPA Lysis Buffer (Strong) RIPA裂解液(強)
            • 產品貨號:20101ES60
            • 產品規格:100ml
            • 產品價格:
            • 類別:蛋白抽提
               
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              產品編號

              規格

              儲存

              價格(元)

              RIPAlysis buffer RIPA(strong)裂解液(強)

              20101ES60

              100ml

              -20

              228.00

              產品描述

              RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer),其本意是Radio Immunoprecipitation Assay,是一種傳統的細胞組織快速裂解液,對動物細胞胞膜、胞漿、胞核成分均有較強裂解作用。根據其裂解液的強度不同,大致可以分為強、中、弱三類。

              本品為裂解強度相對較強的RIPA裂解液(強),含有sodium orthovanadatesodium fluorideEDTAleupeptin等多種抑制劑,可以有效抑制蛋白降解。裂解得到的蛋白樣品可用于常規的WesternIP等實驗。

              運輸與保存方法

              冰袋(wet ice)運輸。

              -20保存,一年有效。盡量避免反復凍融,建議分裝后使用。

              注意事項

              1)需自備PMSF

              2)裂解樣品的所有步驟都需在冰上或4進行。

              3 RIPA裂解液裂解得到的蛋白樣品,可以用BCA蛋白濃度測定試劑盒測定其蛋白濃度(YEASEN CAT NO.20201ES76)。由于含有較高濃度的去垢劑,不能用Bradford法測定由本裂解液裂解得到樣品的蛋白濃度。

              4)為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

              使用說明:

              () 培養細胞樣品:

              1)融解RIPA裂解液,混勻。取適當量的裂解液,在使用前數分鐘內加入PMSF,使PMSF的最終濃度為1mM

              2貼壁細胞:去除培養液,用PBS、生理鹽水或無血清培養液洗一遍(如果血清中的蛋白沒有干擾,可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250μl 裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數下,使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液接觸細胞1-2秒后,細胞就會被裂解。

              懸浮細胞:離心收集細胞,用手指把細胞用力彈散。按照6孔板每孔細胞加入150-250μl 裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多,必需分裝成50-100萬細胞/管,然后再裂解。

              3)充分裂解后,10000-14000g離心3-5分鐘,取上清,即可進行后續的PAGEWestern和免疫沉淀等操作。

              裂解液用量說明:通常6孔板每孔細胞加入150μl裂解液已經足夠,但如果細胞密度非常高可以適當加大裂解液的用量到200μl250μl

              (二)組織樣品:

              1)把組織剪切成細小的碎片。

              2)融解RIPA裂解液,混勻。取適當量的裂解液,在使用前數分鐘內加入PMSF,使PMSF的最終濃度為1mM

              3)按照每20mg組織加入150-250μl裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當添加更多的裂解液,如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當減少裂解液的用量。)

              4)用玻璃勻漿器勻漿,直至充分裂解。

              5)充分裂解后,10000-14000g離心3-5分鐘,取上清,即可進行后續的PAGEWestern和免疫沉淀等操作。

               6)如果組織樣品本身非常細小,可以適當剪切后直接加入裂解液裂解,通過強烈vortex使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清,用于后續實驗。直接裂解的優點是比較方便,不必使用勻漿器,缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。

              【注】:RIPA裂解液的裂解產物中經常會出現一小團透明膠狀物,屬正常現象。該透明膠狀物為含有基因組DNA等的復合物。在不檢測和基因組DNA結合特別緊密的蛋白的情況下,可以直接離心取上清用于后續實驗;如果需要檢測和基因組結合特別緊密的蛋白,則可以通過超聲處理打碎打散該透明膠狀物,隨后離心取上清用于后續實驗。如果檢測一些常見的轉錄因子,例如NF-kappaBp53等時,通常不必進行超聲處理,就可以檢測到這些轉錄因子。   

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              產品編碼

              產品名稱

              規格

              價格(元)

              20114ES60

              RIPA Lysis Buffer (Weak) RIPA裂解液(弱)

              100ml

              228.00

              20115ES60

              RIPA Lysis Buffer (Medium) RIPA裂解液(中)

              100ml

              228.00

              20116ES60

              NP-40 Lysis Buffer NP-40裂解液

              100ml

              228.00

              20117ES60

              SDS Lysis Buffer SDS裂解液

              100ml

              228.00

              20118ES60

              Lysis Buffer for WB/IP Assays 免疫印跡及免疫沉淀用(WB/IP)裂解液

              100ml

              228.00

              20119ES60

              WB/IP裂解液(不含蛋白酶/磷酸酶抑制劑)

              100ml

              148.00

              20120ES60

              10× RIPA裂解液(中)(不含蛋白酶/磷酸酶抑制劑)

              100ml

              228.00

              20121ES60

              1× RIPA裂解液(強)(不含蛋白酶/磷酸酶抑制劑)

              100ml

              148.00

               

               

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