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            產品名稱: Cell Counting Kit (CCK-8) CCK-8試劑盒
            • 產品貨號:40203ES60
            • 產品規格:100T
            • 產品價格:
            • 類別:細胞增殖與毒性
               
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              規格

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              價格(元)

              促銷價格(元)

              Cell Counting KitCCK-8CCK-8試劑盒

              40203ES60

              100T (1 mL)

              4℃

              150.00

              150.00

              Cell Counting KitCCK-8CCK-8試劑盒

              40203ES76

              500T (5 mL)

              4℃

              480.00

              480.00

              Cell Counting KitCCK-8CCK-8試劑盒

              40203ES80

              1000T (10 mL)

              4℃

              920.00

              897.00

              Cell Counting KitCCK-8CCK-8試劑盒

              40203ES88

              3000T (30 mL)

              4℃

              1833.00

              1687.00

              Cell Counting KitCCK-8CCK-8試劑盒

              40203ES92

              10000T (100 mL)

              4℃

              5122.00

              4897.00

              檢測原理

              Cell Counting Kit-8簡稱CCK-8試劑盒,是一種基于WST-8(化學名:2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽)的廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒。

              WST-8屬于MTT的升級產品,工作原理為:在電子耦合試劑存在的情況下,可以被線粒體內的脫氫酶還原生成高度水溶性的橙黃色的甲臜產物(formazan)。顏色的深淺與細胞的增殖成正比,與細胞毒性成反比。使用酶標儀在450mM波長處測定OD值,間接反映活細胞數量。

              CCK-8法應用非常廣泛,如藥物篩選、細胞增殖測定、細胞毒性測定、腫瘤藥敏試驗以及生物因子的活性檢測等。

              保存條件

              4℃干燥避光保存,有效期一年(推薦)。-20℃干燥避光保存,有效期二年。

              CCK-8方法的優勢

              1)表1 CCK-8法與其他細胞增殖/毒性檢測方法的優勢比較

              檢測方法

              MTT

              XTT

              WST-1

              CCK-8

              甲臜產物的水溶性

              差(需加有機溶劑溶解后再檢測)

              產品性狀

              粉末

              2瓶溶液

              溶液

              1瓶溶液

              使用方法

              配成溶液后使用

              現配現用

              即開即用

              即開即用

              檢測靈敏度

              很高

              很高

              檢測時間

              較長

              較短

              較短

              最短

              檢測波長

              560-600 nm

              420-480 nm

              420-480 nm

              430-490 nm

              細胞毒性

              高,細胞形態完全消失

              很低,細胞形態不變

              很低,細胞形態不變

              很低,細胞形態不變

              試劑穩定性

              一般

              較差

              一般

              很好

              批量樣品檢測

              可以

              非常適合

              非常適合

              非常適合

              便捷程度

              一般

              便捷

              便捷

              非常便捷

              2)酚紅和血清對CCK法的檢測不會造成干擾;

              3)細胞毒性非常低,因此加入WST-8顯色后,可以在不同時間反復用酶標儀讀數從而找到最佳測定時間。

              注意事項

              1)建議先做幾個孔摸索接種細胞的數量和加入CCK-8試劑后的培養時間。

              2)有條件的情況下建議采用多通道移液器,可以減少平行孔間的差異。加入CCK-8試劑時,建議斜貼著培養板壁加,不要插到培養基液面下加,容易產生氣泡,會干擾OD值讀數。

              3)白細胞可能需要培養較長時間。

              4)如果沒有450 nm的濾光片,可以使用吸光度在430-490 nm之間的濾光片,但是450 nm濾光片的檢測靈敏度最高。

              5)培養基中酚紅的吸光度可以在計算時,通過扣除空白孔中本底的吸光度而消去,因此不會對檢測造成影響。

              6)為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

              CCK-8試劑盒操作說明

              . 制作標準曲線(測定細胞具體數量)

              1、先用細胞計數板計數所制備的細胞懸液中的細胞數量,然后接種細胞到培養板內。

              2、按比例(例如:1/2比例)依次用培養基等比稀釋成一個細胞濃度梯度,一般要做3-5個細胞濃度梯度,每個濃度建議3-6個復孔。

              3、接種后培養2-4小時使細胞貼壁,然后加CCK-8試劑培養1-4h后測定OD值,制作出一條以細胞數量為橫坐標(X軸),OD值為縱坐標(Y軸)的標準曲線。根據此標準曲線可以測定出未知樣品的細胞數量(使用此標準曲線的前提是實驗的條件要一致,便于確定細胞的接種數量以及加入CCK-8后的培養時間。)

              【注】當使用標準96孔板時,貼壁細胞的最小接種量至少為1,000 /(100 μL 培養基)。檢測白細胞時的靈敏度相對較低,因此推薦接種量不低于2,500 /(100 μL 培養基)。如果要使用24孔板或6孔板實驗,請先計算每孔相應的接種量,并按照每孔培養基總體積的10%加入CCK-8溶液。

              . 細胞活性檢測

              1、在96孔板中接種細胞懸液(100 μL/孔)。將培養板放在培養箱中預培養一段時間(37℃5% CO2)。

              2、向每孔加入10 μL CCK-8溶液(注意不要在孔中生成氣泡,它們會影響OD值的讀數)。

              3、將培養板在培養箱內孵育1-4小時。

              4、用酶標儀測定在450 nm處的吸光度。

              5若暫時不測定OD值,可以向每孔中加入10 μL 0.1MHCL溶液或者1% w/v SDS溶液,并遮蓋培養板避光保存在室溫條件下。24小時內測定,吸光度不會發生變化。

              . 細胞增殖-毒性檢測

              1、在96孔板中配制100 μL的細胞懸液。將培養板放在培養箱預培養24小時(37℃5% CO2)。

              2、向培養板中加入10 μL不同濃度的待測物質。

              3、將培養板在培養箱孵育一段適當的時間(例如:6122448小時)。

              4、向每孔加入10 μL CCK-8溶液(注意不要再孔中生成氣泡,它們會影響OD值的讀數)。

              5、將培養板在培養箱內孵育1-4小時。

              6、用酶標儀測定在450 nm處的吸光度。

              7、若暫時不測定OD值,可以向每孔中加入10 μL 0.1MHCL溶液或者1% w/v SDS溶液,并遮蓋培養板避光保存在室溫條件下。24小時內測定,吸光度不會發生變化。

              【注】如果待測物質有氧化性或還原性的話,可在加CCK-8之前更換新鮮培養基(除去培養基,并用培養基洗滌細胞兩次,然后加入新的培養基),去掉藥物影響。當然藥物影響比較小的情況下,可以不更換培養基,直接扣除培養基中加入藥物后的空白吸收即可。

              活力計算

              細胞活力*(%)=[A(加藥)-A(空白)]/[A0加藥)-A(空白)] ×100
              A(加藥):具有細胞、CCK-8溶液和藥物溶液的孔的吸光度
              A(空白):具有培養基和CCK-8溶液而沒有細胞的孔的吸光度
              A0加藥):具有細胞、CCK-8溶液而沒有藥物溶液的孔的吸光度
              *細胞活力:細胞增殖活力或細胞毒性活力

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